Plasmide CRISPR d'Activation (h) KIF20A: sc-403194-ACT

KIF20A (également connu sous le nom de MKLP2) code une protéine motrice de type kinésine qui s’associe aux microtubules afin de coordonner la progression mitotique, en particulier pendant l’anaphase et la cytocinèse. Il contribue à l’organisation du fuseau central et à l’abscission en régulant la localisation du complexe des passagers chromosomiques ainsi que de kinases mitotiques clés, reliant ainsi l’activité de KIF20A aux voies de contrôle du cycle cellulaire et de stabilité du génome. Une expression dérégulée de KIF20A a été rapportée dans de multiples contextes tumoraux et ce gène est fréquemment utilisé comme marqueur associé à la prolifération dans les études portant sur les programmes oncogéniques de division cellulaire. Par conséquent, KIF20A est largement pertinent pour l’étude de la fidélité de la mitose, de la dynamique du fuseau et des mécanismes qui couplent la cytocinèse à l’aneuploïdie et aux réponses cellulaires au stress.

KIF20A Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de KIF20A sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

KIF20A Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus KIF20A dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription KIF20A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de KIF20A. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus KIF20A natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de KIF20A au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie KIF20A dans les cellules tumorales présentant une expression de KIF20A silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.