Plásmido CRISPR de Activación (h) KDEL receptor 1: sc-402751-ACT

El gen humano **KDELR1** codifica el **receptor KDEL 1**, un receptor de recuperación residente en el Golgi que reconoce motivos tipo KDEL en el extremo C‑terminal de chaperonas solubles del retículo endoplásmico (RE) y media su transporte retrógrado desde el Golgi al RE mediante vesículas recubiertas por **COPI**. Al mantener la proteostasis del RE y respaldar la vía secretora, KDELR1 influye en la señalización del estrés del RE, la dinámica de la respuesta a proteínas mal plegadas (UPR) y el control de calidad de proteínas nacientes. La alteración del tráfico RE–Golgi y del reciclaje de chaperonas es ampliamente relevante para afecciones caracterizadas por disfunción secretora y estrés proteotóxico, incluidas la biología del cáncer, la neurodegeneración y los estados inflamatorios. Por ello, KDELR1 sirve como un nodo útil para investigar cómo la homeostasis del tráfico determina las salidas de señalización y la aptitud celular bajo estrés.

KDEL receptor 1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de KDELR1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

KDEL receptor 1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus KDELR1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional KDELR1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de KDEL receptor 1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo KDELR1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de KDEL receptor 1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía KDEL receptor 1 en células tumorales con expresión de KDELR1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.