Plasmide Double Nickase (h) karyopherin α2: sc-401484-NIC

KPNA2 code la karyophérine alpha 2, un adaptateur importine-α qui reconnaît les signaux classiques de localisation nucléaire et coopère avec l’importine-β pour assurer un transport nucléocytoplasmique, régulé par la GTPase Ran, à travers le complexe du pore nucléaire. En contrôlant l’entrée dans le noyau de facteurs de transcription, de protéines de réparation de l’ADN et de régulateurs du cycle cellulaire, KPNA2 influence la progression mitotique, la stabilité du génome et la signalisation de réponse au stress. Une expression dérégulée de KPNA2 a été associée à des programmes de transport nucléaire altérés et à des phénotypes prolifératifs dans de multiples contextes cancéreux, ce qui en fait une cible pertinente pour étudier la régulation, dépendante du transport, de la signalisation oncogénique et des processus associés à la chromatine. La fonction de KPNA2 est également pertinente pour des travaux portant sur la dynamique de l’import nucléaire, la protéostasie et le contrôle transcriptionnel dépendant du contexte.

karyopherin α2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus KPNA2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de KPNA2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de KPNA2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de KPNA2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.