Plásmido CRISPR de Activación (h) JMJD1B: sc-404249-ACT

KDM3B (JMJD1B) codifica una desmetilasa de histonas con dominio JmjC que elimina principalmente marcas represivas de metilación en H3K9 para promover la accesibilidad de la cromatina y la activación transcripcional. Al remodelar los paisajes epigenéticos, JMJD1B influye en programas génicos específicos de linaje, en la diferenciación celular y en el control dependiente del contexto de la proliferación y las respuestas al estrés. Su actividad se integra con redes más amplias de regulación de la cromatina y puede modular la transcripción dependiente de señales, vinculando señales metabólicas y del desarrollo con los resultados de expresión génica. Se ha informado de la desregulación de KDM3B en múltiples contextos de enfermedad, lo que lo convierte en una diana útil para estudios mecanísticos del control epigenético y de estados transcripcionales aberrantes en células humanas.

JMJD1B El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de KDM3B sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

JMJD1B El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus KDM3B en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional KDM3B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de JMJD1B. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo KDM3B y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de JMJD1B en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía JMJD1B en células tumorales con expresión de KDM3B silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.