Plasmide CRISPR d'Activation (h) JAZF1: sc-404839-ACT

JAZF1 (juxtaposé à une autre protéine à doigt de zinc 1) code un régulateur transcriptionnel à doigt de zinc qui module des programmes d’expression génique liés au métabolisme cellulaire, à la différenciation et aux réponses adaptatives au stress. Dans les cellules humaines, JAZF1 a été associé à des réseaux de contrôle transcriptionnel nucléaire qui influencent l’homéostasie des lipides et du glucose ainsi que, plus largement, des contextes de signalisation endocrinienne. Des études génétiques ont lié des locus de JAZF1 à des variations de traits métaboliques, notamment la susceptibilité au diabète de type 2, et l’altération de l’activité de JAZF1 a été étudiée dans des physiopathologies liées au système endocrinien. Ces caractéristiques font de JAZF1 un nœud utile pour disséquer les circuits transcriptionnels et la régulation des voies métaboliques dans des modèles de recherche biomédicale.

JAZF1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de JAZF1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

JAZF1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus JAZF1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription JAZF1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de JAZF1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus JAZF1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de JAZF1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie JAZF1 dans les cellules tumorales présentant une expression de JAZF1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.