JAM-A Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400687-ACT

F11R codifica a molécula de adesão juncional A (JAM-A), uma proteína da superfamília das imunoglobulinas concentrada nas junções apertadas (tight junctions), onde regula a integridade da barreira epitelial e endotelial, a polaridade celular e a permeabilidade paracelular. A JAM-A participa da montagem e do remodelamento das junções por meio de interações com proteínas de ancoragem (scaffolding) como ZO-1 e afadina, influenciando a organização do citoesqueleto de actina e a sinalização de pequenas GTPases associadas à migração. Ela também contribui para a transmigração de leucócitos e para a biologia plaquetária ao modular a adesão célula–célula e o tráfego inflamatório. A desregulação da expressão ou da localização da JAM-A tem sido associada à disfunção de barreira e à fisiopatologia inflamatória, sendo frequentemente estudada no contexto de adesão e invasão de células tumorais e de interações com o microambiente.

JAM-A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de F11R sem alterar a sequência de ADN subjacente.

JAM-A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus F11R em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição F11R, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de JAM-A. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus F11R nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de JAM-A no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via JAM-A em células tumorais com expressão de F11R silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.