Plasmide CRISPR d'Activation (h) Jagged2: sc-401322-ACT

Le gène humain **JAG2** code **Jagged2**, un ligand ancré à la membrane des récepteurs **NOTCH** qui assure une signalisation juxtacrine régulant les décisions de destinée cellulaire, l’engagement de lignée et la mise en place des patrons tissulaires. L’activation de Notch induite par Jagged2 influence des programmes transcriptionnels contrôlant la prolifération, la différenciation et l’apoptose, avec des liens étroits avec le maintien des cellules souches/progénitrices et les processus du développement. Une dérégulation de la signalisation **JAG2/Notch** a été associée à des états de différenciation épithéliale et hématopoïétique altérés et a été étudiée dans des contextes tels que la signalisation oncogénique, la modulation immunitaire et les troubles du développement. En tant que nœud de voie, Jagged2 est fréquemment utilisé pour étudier les interactions dépendantes de Notch avec les réseaux de signalisation **Wnt**, **TGF-β** et inflammatoires.

Jagged2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de JAG2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Jagged2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus JAG2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription JAG2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Jagged2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus JAG2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Jagged2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Jagged2 dans les cellules tumorales présentant une expression de JAG2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.