Jagged1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400208-ACT

O gene humano JAG1 codifica a Jagged1, um ligante associado à membrana que ativa a sinalização canónica de Notch através da interação com recetores em células adjacentes, promovendo a libertação proteolítica do domínio intracelular de Notch e a reprogramação transcricional. Esta via regula a especificação do destino celular, a diferenciação, a manutenção de células estaminais e progenitoras e a padronização dos tecidos durante o desenvolvimento e na homeostase do adulto. A atividade de Notch conduzida por Jagged1 integra-se com programas de angiogénese, inflamação e remodelação da matriz extracelular para moldar sinais do microambiente e a comunicação intercelular. A desregulação da sinalização JAG1/Notch tem sido associada a perturbações do desenvolvimento e a diversas patologias, incluindo processos oncogénicos e anomalias vasculares, tornando-a um alvo frequente em estudos mecanísticos de vias de sinalização.

Jagged1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de JAG1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Jagged1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus JAG1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição JAG1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Jagged1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus JAG1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Jagged1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Jagged1 em células tumorais com expressão de JAG1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.