Plasmide CRISPR d'Activation (h) JAB1: sc-401302-ACT

COPS5 code JAB1 (également connu sous le nom de CSN5), une sous-unité catalytique du signalosome COP9 qui régule les ligases ubiquitine cullin-RING par déneddylation, façonnant ainsi la protéostasie et la progression du cycle cellulaire. En modulant le renouvellement dépendant de l’ubiquitine de protéines clés de signalisation et de contrôle, JAB1 influence des voies liées aux réponses aux dommages de l’ADN, au contrôle transcriptionnel et à l’adaptation au stress cellulaire. JAB1 interagit également avec la signalisation des récepteurs nucléaires et des programmes transcriptionnels liés à l’immunité, contribuant à coordonner une expression génique spécifique du contexte. Une activité dérégulée de COPS5/JAB1 a été associée à des altérations de la prolifération, de la signalisation de survie et de phénotypes invasifs dans de multiples modèles pertinents pour le cancer, ce qui en fait une cible fréquente d’études mécanistiques des circuits oncogéniques.

JAB1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de COPS5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

JAB1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus COPS5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription COPS5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de JAB1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus COPS5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de JAB1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie JAB1 dans les cellules tumorales présentant une expression de COPS5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.