ITM1 CRISPR Activationプラスミド (h2): sc-405155-ACT-2

ヒトSTT3Aは、小胞体において新生ポリペプチド鎖に対する翻訳共役型のN結合型糖鎖付加を担うオリゴ糖転移酵素（OST）複合体の触媒サブユニットをコードしており、プロテオスタシス、膜／分泌タンパク質の成熟、小胞体（ER）品質管理の形成に寄与する。糖タンパク質生合成における役割を通じて、STT3Aは、ER関連分解（ERAD）、小胞体ストレス応答としてのアンフォールドタンパク質応答（UPR）、ならびに適切なN型糖鎖の導入に依存する受容体・トランスポーターの輸送といった経路に影響を及ぼす。STT3A依存的な糖鎖付加の制御異常は、先天性糖鎖合成異常症（CDG）や、増殖性疾患において観察されるストレス適応表現型と関連づけられており、糖鎖プロセシングの変化がシグナル伝達や細胞間相互作用に影響し得る。ヒト細胞モデルにおけるSTT3Aの遺伝子編集や機能撹乱は、OST複合体機能の解明、糖鎖付加部位およびクライアント依存性のマッピング、さらにERストレスと糖タンパク質成熟が細胞内シグナルネットワークに与える影響の検証に有用である。

ITM1 CRISPR活性化プラスミド（h2）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性STT3Aの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ITM1 CRISPR 活性化プラスミド (h2) は、ヒト細胞株における STT3A 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSTT3A転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ITM1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSTT3A遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるITM1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSTT3A発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるITM1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。