ITF CRISPR Activationプラスミド (h2): sc-416266-ACT-2

ヒトTFF3（trefoil factor 3）遺伝子は分泌性ペプチドITFをコードしており、ITFはムチンと関連するトレフォイル因子として腸管をはじめとする各種粘膜上皮で高発現し、上皮の再構築（restitution）や細胞移動、創傷近傍での修復応答を促進することでバリア機能の維持に寄与する。TFF3/ITFは粘液成分と相互作用するとともに、MAPK/ERKやPI3K/AKTに関連する過程を含む、細胞骨格の再編成や生存プログラムに結びついたシグナル伝達を調節し、その結果、細胞間接着の維持や炎症性ストレスへの適応に影響を及ぼす。TFF3発現の異常は粘膜損傷や慢性炎症の状況で報告されており、消化管疾患に加えて上皮性がんにおいてもしばしば研究対象となり、分化の変化、浸潤、転移に関連する表現型と相関しうる。TFF3の遺伝子編集は、粘膜修復経路の機序解明、上皮—免疫のクロストーク、ならびにオルガノイド、バリア、腫瘍微小環境モデルにおける分泌因子の寄与の解析を可能にする。

ITF CRISPR活性化プラスミド（h2）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TFF3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ITF CRISPR 活性化プラスミド (h2) は、ヒト細胞株における TFF3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTFF3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ITFの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTFF3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるITF依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTFF3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるITF経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。