Plasmide CRISPR d'Activation (m) Islet-1: sc-421157-ACT

Mouse Isl1 code Islet-1, un facteur de transcription LIM-homeodomaine qui orchestre la spécification du destin cellulaire et les programmes de différenciation au cours de l’embryogenèse. Islet-1 régule des réseaux de gènes impliqués dans le développement endocrinien du pancréas, la formation des motoneurones et la biologie des progéniteurs cardiaques, en s’intégrant aux voies de signalisation du développement pour contrôler l’engagement de lignée et la maturation. Une activité d’ISL1 dérégulée a été associée, dans des systèmes modèles, à une altération de l’identité et de la fonction des cellules β, à des défauts neurodéveloppementaux touchant les circuits moteurs et à des phénotypes cardiaques congénitaux, ce qui en fait un nœud utile pour étudier le contrôle transcriptionnel de l’organogenèse. En tant que marqueur de lignée et de progéniteurs, Islet-1 est fréquemment utilisé pour cartographier des trajectoires de développement et pour analyser des éléments régulateurs qui façonnent l’expression génique spécifique des tissus.

Islet-1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Isl1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Islet-1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Isl1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Isl1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Islet-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Isl1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Islet-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Islet-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Isl1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.