Plasmide CRISPR d'Activation (h) IRS-2: sc-400474-ACT

L’IRS2 humain code le substrat du récepteur de l’insuline 2 (IRS-2), une protéine adaptatrice cytosolique qui est phosphorylée sur des résidus tyrosine en aval des récepteurs de l’insuline et d’IGF1, afin de coupler la signalisation des récepteurs aux cascades PI3K–AKT et MAPK. En recrutant des effecteurs à domaine SH2, IRS-2 intègre des signaux qui contrôlent le métabolisme du glucose, la croissance cellulaire, la survie et la différenciation, avec des rôles majeurs dans l’action hépatique de l’insuline et la fonction des cellules β. Une signalisation IRS2 altérée est fréquemment étudiée dans le contexte de la résistance à l’insuline, des dysfonctionnements métaboliques associés à l’obésité et du remodelage des voies de signalisation en biologie des cancers. IRS-2 interagit également avec des signaux liés à la détection des nutriments et à l’inflammation, qui modulent les programmes transcriptionnels et les réponses cellulaires au stress.

IRS-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de IRS2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IRS-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus IRS2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription IRS2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IRS-2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus IRS2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IRS-2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IRS-2 dans les cellules tumorales présentant une expression de IRS2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.