Plasmide CRISPR d'Activation (m) IRF-4: sc-421148-ACT

La souris Irf4 code IRF-4, un facteur de transcription enrichi dans les lymphocytes qui coordonne des programmes géniques contrôlant la différenciation, l’activation et la fonction effectrice des cellules immunitaires. IRF-4 intègre les signaux en aval de l’engagement des récepteurs de l’antigène ainsi que les signaux des cytokines afin de réguler des réseaux transcriptionnels impliqués dans la maturation des cellules B, le développement des plasmocytes, la dynamique des centres germinatifs et la polarisation des cellules T. Par ses interactions avec des partenaires tels que PU.1/SPI1, les facteurs de la famille BATF et des voies associées à NF-κB, IRF-4 contribue à façonner l’accessibilité de la chromatine et l’utilisation d’activateurs (enhancers) spécifiques de lignée. Une activité d’IRF-4 dérégulée est associée à des réponses immunitaires aberrantes et à des mécanismes de maladies inflammatoires, faisant d’Irf4 un nœud clé pour l’étude de la signalisation immunitaire et du contrôle transcriptionnel dans des modèles murins.

IRF-4 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Irf4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IRF-4 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Irf4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Irf4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IRF-4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Irf4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IRF-4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IRF-4 dans les cellules tumorales présentant une expression de Irf4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.