Particules Lentivirales d'Activation (h) IRF-1: sc-400551-LAC

Le facteur régulateur de l’interféron 1 (IRF1) code IRF-1, un facteur de transcription spécifique de séquence induit par les interférons de type I et de type II, qui coordonne les programmes géniques de l’immunité innée et adaptative. IRF-1 régule la présentation de l’antigène, la restriction antivirale, la signalisation des cytokines inflammatoires ainsi que les points de contrôle du cycle cellulaire et de l’apoptose, via des voies incluant la signalisation JAK–STAT et des réseaux transcriptionnels dépendants des éléments de réponse stimulés par l’interféron (ISRE). En modulant l’activation des macrophages, la différenciation des lymphocytes T et l’expression du CMH, IRF-1 influence la surveillance immunitaire et les réponses au stress, fréquemment perturbées lors d’infections, d’auto-immunité et d’échappement immunitaire lié au cancer. Une activité dérégulée d’IRF1 a également été associée à des réponses altérées aux dommages de l’ADN et à des phénotypes suppresseurs de tumeur dépendants du contexte, ce qui en fait un nœud utile pour l’analyse mécanistique des voies de signalisation.

Les particules d'activation lentivirales IRF-1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de IRF1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales IRF-1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription IRF1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de IRF-1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif IRF1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.