Plasmide Double Nickase (h) IRAP: sc-403731-NIC

L’aminopeptidase leucyl/cystinyl (LNPEP), également appelée aminopeptidase sensible à l’insuline (IRAP), est une métallopeptidase M1 dépendante du zinc, localisée dans les compartiments endosomaux et impliquée dans le trafic membranaire régulé. Dans les cellules sensibles à l’insuline, IRAP co-traffique avec les vésicules de stockage de GLUT4 et est mobilisée vers la membrane plasmique à la suite d’une signalisation PI3K–AKT, reliant ainsi LNPEP à la captation du glucose et aux processus de recyclage vésiculaire. IRAP contribue également à la présentation croisée des antigènes via l’élagage des peptides dans les endosomes, façonnant les répertoires peptidiques du CMH de classe I et influençant la surveillance immunitaire. Une activité ou un trafic LNPEP/IRAP dérégulés ont été associés à des altérations de l’homéostasie métabolique et à des contextes de signalisation inflammatoire, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de l’action de l’insuline, de la protéolyse endosomale et des voies liées à l’immunité.

IRAP Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus LNPEP dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de LNPEP. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de LNPEP. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de LNPEP.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.