Plasmide CRISPR d'Activation (h) Integrin β8/ITGB8: sc-401379-ACT

ITGB8 code pour la sous-unité β8 des intégrines, qui s’associe à αv pour former le récepteur αvβ8, impliqué dans l’adhésion cellule–matrice et dans une signalisation bidirectionnelle entre la matrice extracellulaire et le cytosquelette. L’intégrine β8 est un régulateur majeur de l’activation du TGF-β latent et des programmes transcriptionnels en aval dépendants des SMAD, influençant les interactions épithélio-mésenchymateuses, la dynamique du cytosquelette et le remodelage tissulaire. Via un dialogue avec les voies de signalisation des adhésions focales, des GTPases Rho et des MAPK, ITGB8 affecte la migration cellulaire, la fonction barrière et la modulation du microenvironnement immunitaire. Des altérations de l’expression d’ITGB8 ou de l’activité d’αvβ8 ont été associées au remodelage fibrotique et à des programmes d’invasion liés aux tumeurs, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques de la biologie du TGF-β et de la signalisation dépendante des intégrines.

Integrin β8/ITGB8 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ITGB8 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Integrin β8/ITGB8 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ITGB8 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ITGB8, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Integrin β8/ITGB8. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ITGB8 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Integrin β8/ITGB8 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Integrin β8/ITGB8 dans les cellules tumorales présentant une expression de ITGB8 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.