Plasmide CRISPR d'Activation (h) Integrin β5/ITGB5: sc-401017-ACT

ITGB5 code l’intégrine β5, un récepteur d’adhérence transmembranaire qui s’hétérodimérise avec l’intégrine αV pour former αVβ5, reliant des ligands de la matrice extracellulaire au cytosquelette d’actine et déclenchant une signalisation « outside-in ». L’intégrine β5 régule la dynamique des adhérences focales, la migration cellulaire et la survie via des voies incluant FAK/SRC, PI3K–AKT et MAPK, et joue aussi des rôles supplémentaires dans l’endocytose ainsi que dans le dialogue avec des programmes induits par le TGF-β. En modulant les interactions cellule–matrice et la mécanotransduction, ITGB5 influence le comportement des cellules épithéliales et endothéliales, le trafic des cellules immunitaires et le remodelage du microenvironnement tumoral. Une expression ou une signalisation d’ITGB5 dérégulée a été associée à l’invasion, à l’angiogenèse, au remodelage lié à la fibrose et à des phénotypes métastatiques dans de multiples contextes pathologiques.

Integrin β5/ITGB5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ITGB5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Integrin β5/ITGB5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ITGB5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ITGB5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Integrin β5/ITGB5. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ITGB5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Integrin β5/ITGB5 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Integrin β5/ITGB5 dans les cellules tumorales présentant une expression de ITGB5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.