Plasmide Double Nickase (h) Integrin β2/ITGB2/CD18: sc-400921-NIC

ITGB2 code l’intégrine β2 (CD18), une sous-unité de récepteur d’adhérence à expression restreinte aux leucocytes, qui s’associe à des chaînes α (p. ex. ITGAL/CD11a, ITGAM/CD11b, ITGAX/CD11c) pour former des intégrines β2 contrôlant le trafic des cellules immunitaires et leurs fonctions effectrices. Ces hétérodimères régulent l’adhésion ferme à l’endothélium, la migration transendothéliale et la formation de la synapse immunologique via des signalisations « outside-in » et « inside-out » liées au remodelage du cytosquelette, à la dynamique des adhésions focales et à des voies associées à MAPK/PI3K. Les interactions dépendantes de CD18 avec les ligands de la famille ICAM coordonnent le recrutement des neutrophiles et des lymphocytes lors de l’inflammation et modulent les programmes de phagocytose et d’explosion oxydative. Des perturbations génétiques ou fonctionnelles d’ITGB2 sont associées à des défauts d’adhérence leucocytaire et à des réponses inflammatoires altérées, ce qui en fait une cible clé pour l’étude des mécanismes de défense de l’hôte et de dérégulation immunitaire.

Integrin β2/ITGB2/CD18 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ITGB2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ITGB2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ITGB2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ITGB2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.