Plasmide Double Nickase (h) Integrin α1/ITGA1/CD49a: sc-401275-NIC

ITGA1 code l’intégrine α1 (CD49a), qui s’hétérodimérise avec l’intégrine β1 pour former le récepteur du collagène/de la laminine α1β1, médiant l’adhérence cellule–matrice extracellulaire et une signalisation bidirectionnelle. Via son couplage aux complexes d’adhésion focale et à des voies incluant FAK/Src, PI3K–AKT et MAPK, ITGA1 influence le remodelage du cytosquelette, la migration, la survie et la mécanotransduction. CD49a est exprimée dans plusieurs compartiments tissulaires et sous-populations immunitaires, soutenant des processus tels que la résidence tissulaire, l’adhérence aux membranes basales et la différenciation dépendante de la matrice. Une signalisation ITGA1 dérégulée et des interactions cellule–matrice altérées ont été associées à la fibrose, à l’inflammation et à l’invasion tumorale ainsi qu’aux métastases, ce qui en fait un nœud utile pour l’étude de phénotypes induits par l’adhérence.

Integrin α1/ITGA1/CD49a Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ITGA1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ITGA1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ITGA1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ITGA1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.