Plasmide Double Nickase (h) Insulin: sc-400149-NIC

INS code l'insuline, une hormone peptidique synthétisée sous forme de préproinsuline dans les cellules β pancréatiques, puis maturée au sein de la voie sécrétoire afin de réguler l'absorption et le stockage systémiques du glucose. La signalisation insulinique s'effectue via l'activation du récepteur de l'insuline et des cascades en aval PI3K–AKT et MAPK, qui coordonnent le trafic des transporteurs du glucose, la synthèse du glycogène, le métabolisme lipidique et l'expression génique. Un contrôle étroit de la transcription de INS, du repliement de la prohormone et de l'exocytose des granules est essentiel à la détection des nutriments et à l'homéostasie des cellules β. La dérégulation de la production d'insuline ou de sa signalisation est fortement associée au diabète et à des phénotypes métaboliques apparentés, faisant de INS un nœud clé pour l'étude de la fonction des cellules endocrines et des interactions entre voies métaboliques.

Insulin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus INS dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de INS. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de INS. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de INS.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.