Plásmido Doble Nickase (h) Insulin: sc-400149-NIC

INS codifica la insulina, una hormona peptídica sintetizada como preproinsulina en las células β pancreáticas y procesada en la vía secretora para regular la captación y el almacenamiento sistémicos de glucosa. La señalización de la insulina se inicia mediante la activación del receptor de insulina y las cascadas posteriores PI3K–AKT y MAPK, que coordinan el tráfico de los transportadores de glucosa, la síntesis de glucógeno, el metabolismo lipídico y la expresión génica. El control estricto de la transcripción de INS, el plegamiento de la prohormona y la exocitosis de los gránulos es fundamental para la detección de nutrientes y la homeostasis de las células β. La desregulación de la producción o la señalización de la insulina se asocia estrechamente con la diabetes y fenotipos metabólicos relacionados, lo que convierte a INS en un nodo clave para estudiar la función de las células endocrinas y el diálogo entre vías metabólicas.

Insulin El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus INS en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de INS. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de INS. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con INS alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.