Plasmide CRISPR d'Activation (h) INSM1: sc-402424-ACT

INSM1 (insulinoma-associated 1) code un facteur de transcription à doigts de zinc qui agit comme un régulateur clé de la différenciation neuroendocrine et du maintien des lignages. Il module des programmes géniques impliqués dans la spécification du destin cellulaire, la biogenèse des vésicules sécrétoires et les réseaux transcriptionnels endocriniens/neuronaux, en s’intégrant à des voies qui contrôlent le calendrier du développement et la différenciation terminale. Dans les tissus humains, l’expression d’INSM1 est strictement restreinte et est couramment utilisée comme indicateur moléculaire de l’identité neuroendocrine, ce qui reflète son rôle dans la régulation de l’expression des gènes neuroendocriniens. Les programmes transcriptionnels associés à INSM1 lorsqu’ils sont dysrégulés sont fréquemment étudiés dans le contexte de la biologie des tumeurs neuroendocrines, de la plasticité des états cellulaires et des phénotypes dépendants de la différenciation.

INSM1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de INSM1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

INSM1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus INSM1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription INSM1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de INSM1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus INSM1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de INSM1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie INSM1 dans les cellules tumorales présentant une expression de INSM1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.