Plásmido CRISPR de Activación (h) ING4: sc-403707-ACT

ING4 (miembro 4 de la familia de inhibidores del crecimiento) codifica una proteína nuclear similar a un supresor tumoral que actúa como regulador de la transcripción asociado a la cromatina. ING4 participa en complejos vinculados a la acetilación de histonas e influye en programas de expresión génica que gobiernan el control del ciclo celular, la apoptosis, las respuestas al daño del ADN y la senescencia celular, con interacciones documentadas con las vías de señalización de p53 y NF-κB. Al modular las salidas transcripcionales inflamatorias y las rutas sensibles al estrés, ING4 ayuda a restringir la proliferación aberrante y regula las respuestas al estrés genotóxico y oxidativo. Las alteraciones en la expresión o función de ING4 se han asociado con fenotipos oncogénicos y con una señalización inflamatoria desregulada en múltiples contextos relevantes para el cáncer, lo que la convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos del control epigenético.

ING4 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ING4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ING4 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ING4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ING4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ING4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ING4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ING4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ING4 en células tumorales con expresión de ING4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.