Plasmide CRISPR d'Activation (m) Il-28a: sc-437298-ACT

Le gène murin **Ifnl2** code l’interleukine-28a (IL‑28A), un interféron de type III qui transmet son signal via le complexe récepteur **IFNLR1/IL10RB** afin d’activer les voies **JAK–STAT** et d’induire des gènes stimulés par l’interféron, lesquels façonnent des programmes immunitaires antiviraux et associés aux barrières épithéliales. L’IL‑28A influence les réponses des cellules épithéliales et myéloïdes, en modulant la présentation de l’antigène, la production de chimiokines et les interactions avec des capteurs innés tels que les récepteurs de type RIG‑I et les récepteurs de type Toll. Une activité dérégulée des interférons de type III a été associée à une inflammation muqueuse altérée et à une susceptibilité accrue aux infections virales, faisant d’**Ifnl2** un point d’entrée utile pour étudier la biologie des interférons, les interactions hôte–pathogène et la régulation immunitaire dans des modèles murins.

Il-28a CRISPR/Cas9 KOPlasmid Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Ifnl2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Il-28a CRISPR/Cas9 KOPlasmid Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Ifnl2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Ifnl2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Il-28a CRISPR/Cas9 KOPlasmid. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Ifnl2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Il-28a CRISPR/Cas9 KOPlasmid au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Il-28a CRISPR/Cas9 KOPlasmid dans les cellules tumorales présentant une expression de Ifnl2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.