Plasmide CRISPR d'Activation (h) IL-1RAcP: sc-402026-ACT

IL1RAP code la protéine accessoire du récepteur de l’interleukine‑1 (IL‑1RAcP), un co‑récepteur essentiel qui forme un hétérodimère avec IL1R1 ou IL1RL1 (ST2) afin de transmettre la signalisation déclenchée par les cytokines de la famille de l’IL‑1. Après liaison du ligand, IL‑1RAcP contribue à l’assemblage du complexe récepteur et au recrutement de protéines adaptatrices telles que MyD88, initiant des cascades dépendantes d’IRAK qui activent les voies NF‑κB et MAPK pour réguler l’expression des gènes inflammatoires. Cet axe de signalisation influence l’activation de l’immunité innée, la production de cytokines et la communication avec des réponses pilotées par l’inflammasome. Une signalisation associée à IL1RAP dérégulée est fréquemment étudiée dans le contexte de l’inflammation chronique et de la modulation immunitaire liée au microenvironnement tumoral, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques dans des modèles d’immunologie et d’oncologie.

IL-1RAcP Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de IL1RAP sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IL-1RAcP Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus IL1RAP dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription IL1RAP, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IL-1RAcP. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus IL1RAP natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IL-1RAcP au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IL-1RAcP dans les cellules tumorales présentant une expression de IL1RAP silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.