Plasmide CRISPR d'Activation (m) IL-17: sc-421092-ACT

Le gène murin Il17a code l’IL‑17A, une cytokine effectrice emblématique des cellules Th17 et d’autres lymphocytes de type inné, qui coordonne le recrutement des neutrophiles et la défense antimicrobienne au niveau des tissus barrières. L’IL‑17A signale via IL‑17RA/IL‑17RC pour activer des programmes transcriptionnels dépendants de NF‑κB, des MAPK et de C/EBP, induisant des chimiokines telles que CXCL1/CXCL2 ainsi que des médiateurs inflammatoires, notamment l’IL‑6 et le G‑CSF. Cette voie s’articule avec les réseaux IL‑23–STAT3 et agit en synergie avec le TNF et les signaux de la famille de l’IL‑1 afin d’amplifier l’inflammation tissulaire. Une activité dérégulée de l’IL‑17A est largement utilisée chez la souris pour modéliser des circuits inflammatoires pertinents pour des pathologies de type auto-immun, l’immunobiologie des muqueuses et l’inflammation associée aux tumeurs.

IL-17 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Il17a sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IL-17 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Il17a dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Il17a, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IL-17. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Il17a natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IL-17 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IL-17 dans les cellules tumorales présentant une expression de Il17a silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.