Plasmide CRISPR d'Activation (h) IL-13Rα1: sc-405042-ACT

IL13RA1 code le récepteur humain de l’interleukine‑13 alpha 1 (IL‑13Rα1), une sous-unité de liaison au ligand qui forme, avec IL‑4Rα, un complexe de signalisation fonctionnel permettant de transmettre les signaux de l’IL‑13 et de l’IL‑4. L’engagement de ce complexe récepteur active des kinases de la famille JAK ainsi que la signalisation en aval via STAT6, coordonnant des programmes transcriptionnels associés à l’inflammation de type 2, au remodelage épithélial et à la polarisation des macrophages. L’activité d’IL‑13Rα1 influence les interactions entre cytokines dans les tissus immunitaires et les tissus barrières, modulant des réponses telles que la production de mucus, la régulation de la matrice extracellulaire et l’expression de chimiokines. Une signalisation dérégulée associée à IL13RA1 a été étudiée dans des contextes incluant l’inflammation allergique des voies respiratoires, le remodelage fibrotique et l’immunobiologie du microenvironnement tumoral, ce qui en fait une cible pertinente pour l’exploration mécanistique des voies de signalisation.

IL-13Rα1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de IL13RA1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IL-13Rα1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus IL13RA1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription IL13RA1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IL-13Rα1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus IL13RA1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IL-13Rα1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IL-13Rα1 dans les cellules tumorales présentant une expression de IL13RA1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.