Plasmide Double Nickase (h) Ikaros: sc-400530-NIC

IKZF1 code Ikaros, un facteur de transcription à doigts de zinc qui orchestre la spécification des lignages hématopoïétiques et la différenciation des cellules immunitaires en régulant l'accessibilité de la chromatine et les programmes transcriptionnels. Ikaros intègre des signaux de signalisation pour contrôler des réseaux de gènes impliqués dans le développement lymphoïde, la compétence de signalisation du récepteur des cellules B, la transcription répondant aux cytokines et les points de contrôle du cycle cellulaire. En recrutant des complexes de remodelage de la chromatine et de modification des histones, il influence l'activité des enhancers et des promoteurs au cours des différents stades du développement. Une dérégulation de la transcription dépendante d'IKZF1 est associée à une maturation altérée des lymphocytes et est fréquemment étudiée dans le contexte des mécanismes des maladies hématologiques et du remaniement transcriptionnel leucémogène.

Ikaros Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus IKZF1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de IKZF1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de IKZF1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de IKZF1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.