Plasmide Double Nickase (m) IGFBP5: sc-421066-NIC

Le gène murin *Igfbp5* code la protéine 5 de liaison aux facteurs de croissance de type insuline (IGFBP5), un régulateur sécrété et associé à la matrice extracellulaire (MEC) qui module la biodisponibilité et la signalisation d’IGF-I/IGF-II via les voies IGF1R–PI3K/AKT et MAPK. Au-delà de la séquestration des IGF, IGFBP5 peut influencer l’adhésion, la migration et la survie cellulaires grâce à des interactions avec des composants de la MEC et à des activités indépendantes des IGF dépendantes du contexte. L’expression d’*Igfbp5* est liée à des processus de remodelage tissulaire, notamment la myogenèse, l’ostéogenèse et l’activation des fibroblastes, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la fibrose, de la réparation des plaies et du développement squelettique. Une dérégulation d’IGFBP5 a été associée à des programmes de prolifération et de différenciation altérés dans les microenvironnements tumoraux ainsi qu’au remodelage stromal, ce qui soutient son utilisation comme nœud mécanistique dans la recherche sur la signalisation des facteurs de croissance.

IGFBP5 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Igfbp5 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Igfbp5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Igfbp5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Igfbp5.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.