Plasmide CRISPR d'Activation (h) IFIT3: sc-403557-ACT

La protéine induite par l’interféron contenant des répétitions tétratricopeptides 3 (IFIT3) est un produit de gène stimulé par l’interféron qui amplifie les défenses antivirales innées en aval de l’interféron de type I et des voies de signalisation des récepteurs de reconnaissance des motifs (PRR). IFIT3 agit au sein de complexes IFIT cytoplasmiques pour moduler la traduction et la détection de l’ARN, influençant l’induction des ISG, l’intensité de la signalisation JAK–STAT et les programmes transcriptionnels inflammatoires. En façonnant l’amplitude et la persistance des réponses à l’interféron, IFIT3 est fréquemment étudiée dans le contexte des interactions hôte–pathogène, de la régulation immunitaire et du stress cellulaire induit par l’interféron. Une expression dérégulée d’IFIT3 a été associée à des microenvironnements immunitaires altérés et à des états inflammatoires, ce qui étaye sa pertinence pour des études mécanistiques en biologie des infections et dans les processus pathologiques liés à l’immunité.

IFIT3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de IFIT3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IFIT3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus IFIT3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription IFIT3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IFIT3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus IFIT3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IFIT3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IFIT3 dans les cellules tumorales présentant une expression de IFIT3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.