Plasmide CRISPR/Cas9 KO IER2 (h): sc-407175

Présentation

Immediate early response 2 (IER2) est un gène rapidement induit et réactif aux stimuli, qui intègre des signaux extracellulaires issus de facteurs de croissance, de signaux de stress et d’entrées mitogènes en programmes transcriptionnels transitoires. L’activité d’IER2 a été associée à la régulation de la migration cellulaire, au remodelage du cytosquelette et à un contrôle de la prolifération dépendant du contexte, via la signalisation « immediate early » liée à MAPK/ERK et les modifications d’expression génique en aval. En tant qu’effecteur de réponse immédiate, IER2 contribue à façonner le remodelage précoce des réseaux transcriptionnels, influençant la dynamique d’adhérence et le comportement invasif dans de nombreux modèles cellulaires. Une expression altérée d’IER2 a été rapportée dans divers contextes pertinents pour la maladie, ce qui étaye son utilisation comme nœud mécanistique pour étudier le couplage entre signalisation et transcription en cancérologie et en biologie de l’inflammation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO IER2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène IER2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du IER2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert IER2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine IER2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en IER2 pour l'étude de la signalisation de IER2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de IER2 essentiels à la fonction de IER2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de IER2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le IER2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le IER2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus IER2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le IER2 plasmide HDR (h) et le IER2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie IER2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles IER2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.