IER2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-407175-ACT

Immediate early response 2 (IER2) é um regulador transcricional rapidamente induzido, implicado na ligação entre estímulos extracelulares e programas subsequentes de expressão génica. Em células humanas, o IER2 tem sido associado à sinalização responsiva a MAPK/ERK e a redes transcricionais imediatas mais amplas que influenciam a migração celular, a remodelação do citoesqueleto e a proliferação e diferenciação dependentes do contexto. Alterações na expressão de IER2 foram relatadas em múltiplos contextos patológicos, incluindo a biologia tumoral, onde se associam a mudanças no comportamento invasivo e a estados transcricionais adaptativos ao stress. Estas características fazem do IER2 um nó útil para dissecar circuitos regulatórios dependentes de estímulos e a temporização transcricional em modelos relevantes para a doença.

IER2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IER2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IER2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IER2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IER2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IER2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IER2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IER2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IER2 em células tumorais com expressão de IER2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.