Plasmide Double Nickase (h) IDH3A: sc-404788-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) IDH3A correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide IDH3A Double Nickase (h) et le plasmide IDH3A Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant IDH3A. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: IDH3A Antibody (A-10): sc-398021
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) IDH3A | sc-404788-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) IDH3A | sc-404788-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
IDH3A code la sous-unité alpha de l’isocitrate déshydrogénase 3 NAD‑dépendante, une enzyme clé du cycle mitochondrial de l’acide tricarboxylique (cycle de Krebs, TCA) qui catalyse la décarboxylation oxydative de l’isocitrate en α‑cétoglutarate, avec production concomitante de NADH. En couplant le flux de carbone à l’activité de la chaîne respiratoire, IDH3A contribue au métabolisme énergétique cellulaire, à l’équilibre rédox et à la disponibilité de précurseurs biosynthétiques. Une altération de la fonction d’IDH3A peut perturber le métabolisme mitochondrial et a été associée à des troubles impliquant la phosphorylation oxydative et les besoins énergétiques des tissus, ce qui étaye sa pertinence pour des études sur le stress métabolique, la signalisation mitochondriale et le contrôle de la croissance.
IDH3A Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus IDH3A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de IDH3A. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de IDH3A. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de IDH3A.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.