Particules Lentivirales d'Activation (h) Id2: sc-400550-LAC

L’ID2 humain code l’inhibiteur de liaison à l’ADN 2 (Id2), une protéine hélice–boucle–hélice (HLH) dépourvue de domaine de liaison à l’ADN, qui agit principalement en séquestrant les protéines E, limitant ainsi les programmes transcriptionnels spécifiques de lignée. En modulant des réseaux géniques pilotés par les bHLH, Id2 régule la progression du cycle cellulaire, la différenciation et le maintien d’états de type progéniteur dans de nombreux tissus, en intégrant des signaux issus de voies telles que TGF-β/BMP et Notch. Une expression altérée d’ID2 est associée à des phénotypes de différenciation et de prolifération dérégulées observés dans divers contextes cancéreux et immunitaires, ce qui en fait une cible fréquemment étudiée du contrôle transcriptionnel et épigénétique. Les chercheurs analysent couramment ID2 pour comprendre comment l’antagonisme de facteurs de transcription façonne les décisions de destinée cellulaire, les réponses au stress et les programmes développementaux.

Les particules d'activation lentivirales Id2 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de ID2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Id2 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription ID2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Id2. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif ID2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.