Plasmide Double Nickase (h) HYPB: sc-402789-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) HYPB correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide HYPB Double Nickase (h) et le plasmide HYPB Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant SETD2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) HYPB | sc-402789-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) HYPB | sc-402789-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SETD2 (HYPB) code une méthyltransférase d’histones à domaine SET qui catalyse la triméthylation de la lysine 36 de l’histone H3 (H3K36me3) au cours de l’élongation transcriptionnelle, reliant l’état de la chromatine à l’activité de l’ARN polymérase II. Cette marque contribue à coordonner le traitement co‑transcriptionnel des ARN, les réponses au stress de réplication de l’ADN et la réparation dirigée par homologie, et elle participe au maintien de l’intégrité du génome en modulant l’accessibilité de la chromatine. SETD2 méthyle également des substrats non histones, notamment l’α‑tubuline et STAT1, ce qui l’associe à la régulation du cytosquelette et aux programmes transcriptionnels induits par l’interféron. La dérégulation ou la perte de H3K36me3 dépendante de SETD2 est liée à des profils d’épissage altérés, à une augmentation des taux de mutation et à une instabilité épigénétique observées dans de multiples contextes pertinents en cancérologie, ce qui explique son usage fréquent dans des études mécanistiques portant sur la chromatine et les voies de réponse aux dommages de l’ADN.
HYPB Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SETD2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SETD2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SETD2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SETD2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.