HYAL1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-404500-NIC

HYAL1はヒアルロノグルコサミニダーゼ1をコードしており、ヒアルロン酸およびその他のグリコサミノグリカンを分解するリソソーム局在のエンドグリコシダーゼです。これにより、細胞外マトリックス（ECM）のターンオーバーや組織の水分保持が調節されます。HYAL1はヒアルロン酸の異化（カタボリズム）を制御することで、細胞周囲マトリックスの構築、細胞接着・遊走、ならびに炎症や間質リモデリングに関連するシグナル出力に影響を及ぼします。HYAL1活性の変化は、がん生物学、線維化過程、血管病変で観察されるような、マトリックス分解とリモデリングの制御異常表現型と関連づけられています。そのためHYAL1は、リソソームにおける糖鎖処理と微小環境依存的な細胞挙動を結び付ける経路において広く研究されています。

HYAL1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における HYAL1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、HYAL1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、HYAL1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、HYAL1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。