Plasmide Double Nickase (m) HtrA4: sc-436033-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) HtrA4 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide HtrA4 Double Nickase (m) et le plasmide HtrA4 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Htra4. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) HtrA4 | sc-436033-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) HtrA4 | sc-436033-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La souris Htra4 code la protéase à sérine sécrétée HtrA4 (famille HtrA), une enzyme de contrôle qualité qui clive les protéines mal repliées ou endommagées et contribue à la régulation de la protéostasie extracellulaire et péricellulaire. Les protéases HtrA s’inscrivent à l’interface de programmes de réponse au stress, notamment des voies de signalisation liées à la réponse aux protéines mal repliées (UPR), et peuvent influencer des voies associées aux facteurs de croissance et à la matrice, qui façonnent la survie cellulaire, l’adhérence et le remodelage tissulaire. Une expression altérée de HtrA4 a été rapportée dans des contextes d’inflammation, de biologie vasculaire et de physiologie reproductive/placentaire, ce qui étaye son utilisation comme nœud mécanistique dans des études centrées sur le stress et le microenvironnement. Dans des modèles murins, la perturbation de HtrA4 peut aider à disséquer le remodelage dépendant des protéases et les interactions entre voies de signalisation pertinentes pour des dysfonctions tissulaires associées aux maladies.
HtrA4 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Htra4 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Htra4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Htra4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Htra4.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.