HSP 56 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403455-ACT

FKBP4は、免疫フィリンであるFKBP52（HSP56）をコードしており、ペプチジルプロリルcis–transイソメラーゼであると同時に、HSP90の共シャペロンとしてクライアントタンパク質の折りたたみ、成熟、細胞内輸送を制御します。HSP56は、グルココルチコイド受容体、アンドロゲン受容体、プロゲステロン受容体経路などのステロイドホルモン受容体シグナル伝達を調節する多タンパク質シャペロン複合体の一員として機能し、受容体の安定性、核内移行、転写出力に影響を及ぼします。FKBP4は、TPRドメインを介したHSP90および各種共シャペロンとの相互作用により、ストレス応答性のプロテオスタシスと、細胞の増殖・分化を形作るシグナル伝達プログラムとを統合します。FKBP4を含むシャペロン—共シャペロンネットワークの破綻は、内分泌シグナル伝達の変化やタンパク質恒常性の異常と関連し、がん生物学や神経変性研究において重要な表現型と結び付けられています。

HSP 56 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性FKBP4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

HSP 56 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における FKBP4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFKBP4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性HSP 56の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFKBP4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるHSP 56依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFKBP4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるHSP 56経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。