Plasmide Double Nickase (h) HSF1: sc-400432-NIC

Le HSF1 (heat shock factor 1) humain est un régulateur transcriptionnel maître de la réponse au choc thermique, qui coordonne l'expression inductible de chaperonnes moléculaires telles que HSP70 et HSP90 afin de maintenir la protéostasie lors du stress cellulaire. En cas de stress protéotoxique, HSF1 subit une trimérisation et s'accumule dans le noyau, se lie aux éléments de réponse au choc thermique (HSE) et déclenche des programmes influençant le repliement des protéines, le contrôle qualité et un métabolisme adaptatif au stress. L'activité de HSF1 s'articule avec des voies régulant l'apoptose, l'autophagie et la réponse aux protéines mal repliées, modulant la résilience cellulaire face aux agressions oxydatives, thermiques et métaboliques. Une signalisation HSF1 dérégulée a été impliquée dans des troubles de la protéostasie ainsi que dans des phénotypes d'adaptation au stress observés dans divers modèles de maladies, ce qui étaye les études mécanistiques des réseaux transcriptionnels sensibles au stress.

HSF1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HSF1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HSF1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HSF1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HSF1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.