Plasmide CRISPR/Cas9 KO HSF1 (h2): sc-400432-KO-2

Présentation

Le facteur de choc thermique 1 (HSF1) est un régulateur transcriptionnel maître qui coordonne la réponse cellulaire au choc thermique en induisant des chaperons et des gènes de la protéostase, notamment des membres des familles HSP70 et HSP90, afin de préserver le repliement des protéines et de limiter le stress protéotoxique. Au-delà de l’adaptation au stress aigu, HSF1 intègre des signaux liés au fonctionnement du protéasome, à la traduction et à l’état métabolique pour influencer le contrôle de la qualité des protéines, l’organisation du cytosquelette et les programmes de survie cellulaire. L’activité de HSF1 croise des voies telles que la stabilisation des clients dépendante de HSP90, l’autophagie et la dynamique des granules de stress, façonnant la manière dont les cellules répondent aux facteurs de stress environnementaux et intracellulaires. Une signalisation HSF1 dérégulée a été impliquée dans la transformation maligne et le maintien des tumeurs, ainsi que dans la neurodégénérescence et d’autres troubles associés au mauvais repliement des protéines, ce qui en fait une cible fréquemment utilisée dans les études mécanistiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO HSF1 (h2) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène HSF1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du HSF1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert HSF1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine HSF1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en HSF1 pour l'étude de la signalisation de HSF1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de HSF1 essentiels à la fonction de HSF1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de HSF1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le HSF1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le HSF1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus HSF1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le HSF1 plasmide HDR (h) et le HSF1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie HSF1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles HSF1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.