Plasmide CRISPR d'Activation (h) HSF1: sc-400432-ACT

Le facteur de choc thermique 1 (HSF1) est un régulateur transcriptionnel maître de la réponse cellulaire au choc thermique, qui maintient la protéostasie en situation de stress en induisant des protéines de choc thermique et des co-chaperons, notamment les réseaux HSP70 et HSP90. Dans les cellules humaines, HSF1 intègre les signaux de stress protéotoxique avec des programmes de contrôle transcriptionnel et traductionnel, façonnant les réponses au stress oxydatif, au mauvais repliement des protéines et aux agressions environnementales. L’activité de HSF1 recoupe des voies qui régissent le contrôle qualité des protéines, l’autophagie et les décisions de survie cellulaire, et une régulation altérée des programmes de stress liés à HSF1 a été associée à la biologie des cancers et aux mécanismes des maladies neurodégénératives. Moduler l’expression de HSF1 est donc utile pour disséquer les circuits d’adaptation au stress et le remodelage du transcriptome en aval dans divers modèles cellulaires.

HSF1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HSF1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HSF1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HSF1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HSF1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HSF1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HSF1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HSF1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HSF1 dans les cellules tumorales présentant une expression de HSF1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.