Plasmide CRISPR d'Activation (h) HRASLS3: sc-409231-ACT

PLA2G16 code pour HRASLS3, une phospholipase/acyltransférase associée aux membranes qui module la composition lipidique cellulaire en catalysant des réactions de phospholipase A1/A2 et d’acylation des lysophospholipides. En remodelant les lipides dérivés de la phosphatidylcholine et en générant des acides gras bioactifs, HRASLS3 influence la dynamique membranaire, le trafic vésiculaire et la signalisation médiée par les lipides, en interface avec les voies liées à Ras et les réponses au stress cellulaire. Une activité altérée de PLA2G16/HRASLS3 a été associée à une dérégulation du métabolisme lipidique et à des phénotypes pertinents pour la transformation oncogénique, l’invasion et la signalisation inflammatoire dans de multiples contextes modèles. Ces propriétés font d’HRASLS3 une cible utile pour des études mécanistiques reliant le remodelage lipidique à la prolifération, la migration et l’adaptation métabolique.

HRASLS3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PLA2G16 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HRASLS3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PLA2G16 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PLA2G16, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HRASLS3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PLA2G16 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HRASLS3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HRASLS3 dans les cellules tumorales présentant une expression de PLA2G16 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.