HR Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420945

Panoramica

Il gene Hr del topo codifica la proteina nucleare hairless (HR), un corepressore trascrizionale che modula i programmi di espressione genica a valle dei recettori nucleari per gli ormoni, inclusi i recettori dell’ormone tiroideo e dell’acido retinoico. HR influenza la differenziazione epidermica e il ciclo del follicolo pilifero coordinando la repressione associata alla cromatina nella cute e nei tessuti annessiali. L’alterazione della funzione di Hr compromette la morfogenesi follicolare e l’omeostasi dei cheratinociti, rendendolo un locus ampiamente utilizzato per lo studio delle vie che regolano la crescita dei capelli e la biologia della barriera cutanea. Hr è quindi rilevante per modelli sperimentali di fenotipi simili all’alopecia e per indagini più ampie sul controllo trascrizionale nello sviluppo cutaneo.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO HR (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Hr in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Hr insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Hr a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina HR.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Hr per lo studio della segnalazione di HR, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Hr critici per la funzione di HR
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Hr per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal HR CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal HR CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Hr. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal HR Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR HR (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Hr per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Hr definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.