HoxD10 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403328-ACT

HOXD10 codifica o fator de transcrição homeobox HoxD10, um regulador-chave do padrão ântero‑posterior e da morfogênese dos membros, que ajuda a estabelecer a identidade celular por meio da ligação ao DNA específica de sequência e do controle transcricional. Em tecidos diferenciados, o HOXD10 contribui para programas que governam a migração e a adesão celulares, bem como a remodelação da matriz extracelular, interagindo com redes transcricionais do desenvolvimento e vias de sinalização que moldam o comprometimento de linhagem. Alterações na expressão de HOXD10 ou perturbações regulatórias têm sido associadas a fenótipos oncogênicos, incluindo mudanças na invasividade e no potencial metastático, refletindo seu papel no controle de conjuntos de genes ligados à dinâmica epitélio‑mesênquima. Como regulador do desenvolvimento com atividade dependente do contexto, o HOXD10 é frequentemente utilizado para estudar circuitos transcricionais, regulação da cromatina e estados de expressão gênica relevantes para doenças em modelos de células humanas.

HoxD10 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HOXD10 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HoxD10 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HOXD10 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HOXD10, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HoxD10. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HOXD10 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HoxD10 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HoxD10 em células tumorais com expressão de HOXD10 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.