Plasmide CRISPR/Cas9 KO hnRNP R (h): sc-404489

Présentation

HNRNPR code la ribonucléoprotéine nucléaire hétérogène humaine R (hnRNP R), une protéine liant l’ARN qui s’associe aux transcrits naissants et aux complexes ribonucléoprotéiques afin de réguler la maturation du pré‑ARNm, la stabilité de l’ARNm et la localisation subcellulaire de l’ARN. hnRNP R contribue à la régulation post‑transcriptionnelle des gènes via des interactions qui influencent l’épissage alternatif et le transport de l’ARN, reliant le métabolisme nucléaire de l’ARN au contrôle de la traduction dans le cytoplasme. La dérégulation des protéines liant l’ARN et des réseaux associés à l’épissage est impliquée dans les mécanismes des maladies neurodégénératives et neuromusculaires, ce qui fait de HNRNPR un nœud utile pour l’étude de l’homéostasie de l’ARN. L’exploration expérimentale de hnRNP R étaye des analyses à l’échelle des voies portant sur le remodelage du transcriptome, la dynamique des granules d’ARN sensibles au stress et des phénotypes liés à la protéostase.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO hnRNP R (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène HNRNPR dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du HNRNPR, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert HNRNPR à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine hnRNP R.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en HNRNPR pour l'étude de la signalisation de hnRNP R, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de HNRNPR essentiels à la fonction de hnRNP R
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de HNRNPR pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le hnRNP R plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le hnRNP R plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus HNRNPR. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le hnRNP R plasmide HDR (h) et le hnRNP R (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie HNRNPR pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles HNRNPR définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.