Plasmide CRISPR d'Activation (h) hnRNP E2: sc-402274-ACT

PCBP2 code pour la ribonucléoprotéine nucléaire hétérogène E2 (hnRNP E2), une protéine liant l’ARN qui reconnaît des éléments riches en cytosines (C) afin de coordonner la régulation post‑transcriptionnelle des gènes. hnRNP E2 influence l’épissage des ARNm, leur stabilité, la polyadénylation et la traduction, modulant ainsi la production protéique en réponse aux signaux cellulaires et au stress. Elle contribue à l’assemblage de complexes ribonucléoprotéiques et interagit avec des réseaux qui contrôlent le métabolisme de l’ARN et l’initiation de la traduction. Une activité dérégulée de PCBP2/hnRNP E2 a été associée à des programmes d’expression génique altérés en biologie des cancers, à l’utilisation des ARN viraux et à des contextes de signalisation inflammatoire, ce qui en fait une cible d’étude pertinente pour comprendre les mécanismes de régulation des gènes et le contrôle des états cellulaires.

hnRNP E2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PCBP2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

hnRNP E2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PCBP2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PCBP2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de hnRNP E2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PCBP2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de hnRNP E2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie hnRNP E2 dans les cellules tumorales présentant une expression de PCBP2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.