hnRNP C1/C2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400993-ACT

HNRNPC codifica a ribonucleoproteína nuclear heterogênea C1/C2, proteínas nucleares abundantes de ligação a RNA que se associam ao pré‑mRNA nascente para regular a seleção de sítios de splicing, a fidelidade do splicing alternativo e a maturação do mRNA. A hnRNP C1/C2 participa do processamento de RNA co‑transcricional, influencia a exportação e a estabilidade do mRNA e ajuda a manter a integridade do transcriptoma ao coordenar a formação de complexos ribonucleoproteicos. Por meio dessas funções, ela se conecta a programas centrais de expressão gênica, incluindo vias de metabolismo de RNA e respostas transcricionais ligadas ao ciclo celular. A expressão desregulada de HNRNPC ou a atividade da hnRNP C1/C2 tem sido associada a paisagens de splicing alteradas e a processamento de RNA aberrante observados em múltiplos contextos de doença, sustentando seu uso como um ponto mecanístico em estudos de fenótipos mediados por RNA.

hnRNP C1/C2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HNRNPC sem alterar a sequência de ADN subjacente.

hnRNP C1/C2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HNRNPC em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HNRNPC, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de hnRNP C1/C2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HNRNPC nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de hnRNP C1/C2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via hnRNP C1/C2 em células tumorais com expressão de HNRNPC silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.