hnRNP A0 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-406924-ACT

HNRNPA0 codifica hnRNP A0, una proteina legante l’RNA che si associa a complessi di ribonucleoproteine nucleari eterogenee (hnRNP) per influenzare la regolazione genica post-trascrizionale. hnRNP A0 è stata implicata nel controllo della stabilità e della traduzione dell’mRNA, inclusi trascritti coinvolti nel controllo del ciclo cellulare e nella segnalazione in risposta allo stress, collegandola più in generale al metabolismo dell’RNA e alle vie di checkpoint. Modulando il destino di specifici mRNA, hnRNP A0 può influenzare le risposte cellulari al danno al DNA, all’infiammazione e ai segnali proliferativi. Un’attività deregolata della famiglia hnRNP e programmi alterati di processamento dell’RNA sono frequentemente osservati nel cancro e in altri disturbi con controllo dell’espressione genica compromesso, rendendo HNRNPA0 un nodo utile per studi meccanicistici.

hnRNP A0 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di HNRNPA0 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

hnRNP A0 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus HNRNPA0 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione HNRNPA0, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di hnRNP A0. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus HNRNPA0 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da hnRNP A0 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via hnRNP A0 nelle cellule tumorali con espressione di HNRNPA0 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.