Plasmide CRISPR d'Activation (h) hnRNP A0: sc-406924-ACT

HNRNPA0 code hnRNP A0, une protéine liant l’ARN qui s’associe à des complexes de ribonucléoprotéines nucléaires hétérogènes afin d’influencer la régulation post‑transcriptionnelle de l’expression génique. hnRNP A0 a été impliquée dans le contrôle de la stabilité et de la traduction des ARNm, notamment de transcrits intervenant dans le contrôle du cycle cellulaire et la signalisation en réponse au stress, la reliant plus largement au métabolisme de l’ARN et aux voies des points de contrôle. En modulant le devenir d’ARNm spécifiques, hnRNP A0 peut affecter les réponses cellulaires aux dommages à l’ADN, à l’inflammation et aux signaux de prolifération. Une activité dérégulée de la famille hnRNP et des programmes de maturation/traitement de l’ARN altérés sont fréquemment observés dans le cancer et d’autres troubles caractérisés par un contrôle perturbé de l’expression génique, faisant de HNRNPA0 un nœud utile pour des études mécanistiques.

hnRNP A0 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HNRNPA0 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

hnRNP A0 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HNRNPA0 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HNRNPA0, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de hnRNP A0. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HNRNPA0 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de hnRNP A0 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie hnRNP A0 dans les cellules tumorales présentant une expression de HNRNPA0 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.