Plasmide CRISPR/Cas9 KO HNF-6 (h): sc-401082

Présentation

ONECUT1 code le facteur nucléaire hépatocytaire 6 (HNF-6), un facteur de transcription à homéoboîte CUT qui coordonne des programmes de régulation génique dans les tissus dérivés de l’endoderme, en particulier le foie et le pancréas. HNF-6 module la différenciation épithéliale, la morphogenèse des canaux et l’expression de gènes métaboliques via le contrôle transcriptionnel de voies du développement et de la fonction hépatobiliaire, notamment par des interactions (cross-talk) avec les voies de signalisation Notch et TGF-β. Dans les cellules humaines, une activité altérée de ONECUT1 a été associée à une perturbation de l’homéostasie du glucose, du développement endocrinien pancréatique et à des dysfonctionnements hépatobiliaires, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des perturbations des réseaux transcriptionnels. Ses cibles en aval et ses interactions coopératives avec d’autres facteurs de transcription hépatiques et pancréatiques positionnent HNF-6 comme un nœud clé pour décrypter la spécification des lignages et la régulation du métabolisme.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO HNF-6 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ONECUT1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ONECUT1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ONECUT1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine HNF-6.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ONECUT1 pour l'étude de la signalisation de HNF-6, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ONECUT1 essentiels à la fonction de HNF-6
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ONECUT1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le HNF-6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le HNF-6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ONECUT1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le HNF-6 plasmide HDR (h) et le HNF-6 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ONECUT1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ONECUT1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.