Plasmide Double Nickase (m) HMG-I/HMG-Y: sc-420879-NIC

Hmga1 code pour la protéine architecturale associée à la chromatine HMG-I/HMG-Y, un facteur de liaison à l’ADN de type AT-hook qui remodèle la structure locale de la chromatine et facilite l’assemblage d’enhanceosomes au niveau de régions régulatrices riches en AT. En modulant l’accès des facteurs de transcription et l’organisation de la chromatine à plus haut niveau, HMG-I/HMG-Y influence des programmes d’expression génique qui gouvernent la progression du cycle cellulaire, la différenciation et la transcription en réponse au stress, notamment des voies en aval de MAPK et d’autres signaux mitogènes. Dans les modèles murins, l’activité de Hmga1 est fréquemment étudiée dans le contexte de la régulation du développement et du contrôle épigénétique de réseaux transcriptionnels spécifiques de lignée. Une dérégulation de la fonction de HMGA1/HMG-I/HMG-Y a été associée à des états transcriptionnels aberrants liés à la transformation oncogénique et à une plasticité cellulaire altérée, ce qui en fait un nœud mécanistique pertinent pour des études de régulation génique en lien avec les maladies.

HMG-I/HMG-Y Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Hmga1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Hmga1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Hmga1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Hmga1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.